A.不匹配的粘末端可通過部分填補后連接。
B.同聚尾法連接不僅連接效率高,也易回收插入的片段。
C.限制酶切割DNA后加入EDTA-SDS終止液抑制限制酶活性,將有利于重組連接。
D.Mg2+-ATP是T4DNA連接酶反應(yīng)時的必須因素。
E.平末端連接時,在反應(yīng)體系中加入適量凝聚劑可提高連接效率。
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A.其核心是利用末端轉(zhuǎn)移酶的功能,將載體和外源DNA的3‘端再加上一端寡核苷酸。
B.不易自身環(huán)化。
C.連接效率高
D.適用于CDNA克隆
E.可能會產(chǎn)生某種限制酶切位點。
A.避免載體自身環(huán)化
B.提高連接效率
C.控制外源基因的插入方向
D.便于轉(zhuǎn)化后的篩選
E.便于修改閱讀框
A.引入某些限制酶切位點。
B.人工構(gòu)建載體。
C.增加調(diào)控元件。
D.調(diào)整閱讀框。
E.通過接頭引入與目的基因相同的限制酶位點,并對目的基因相應(yīng)酶切點進行甲基化修飾保護,可保護目的基因不受限制酶破壞。
A.平末端連接
B.粘末端連接
C.加接頭連接
D.同聚尾連接
E.T載體連接
A.Mg2+
B.BSA
C.ATP
D.PO43-
E.EDTA
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