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問答題根據(jù)以下分析結(jié)果確定蛋白質(zhì)的亞基數(shù)目及連接方式：（1）凝膠過濾測得分子量為200 KD；（2）SDS-PAGE測得分子量為100 KD；（3）2-巰基乙醇存在下的SDS-PAGE測得分子量為40KD和60KD。

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1.問答題說明多肽氨基酸序列自動分析法的基本原理。根據(jù)此原理，試設(shè)計一臺多肽氨基酸序列自動分析儀。

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2.問答題有一個七肽，經(jīng)分析其氨基酸組成為Lys，Pro，Arg，Phe，Ala，Tyr和Ser。此肽與DNFB不反應(yīng)。用胰凝乳蛋白酶降解，得到兩個肽段，其氨基酸組成分別為Ala，Tyr，Ser和Pro，Phe，Lys，Arg。這兩個肽段與DNFB反應(yīng)，分別生成DNP-Ser和DNP一Lys。此肽與胰蛋白酶作用，同樣生成兩個肽段，它們的氨基酸組成分別為Arg，Pro和Phe，Tyr，Lys，Ser，Ala。試推測此多肽的結(jié)構(gòu)和氨基酸序列。

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3.問答題-種多肽經(jīng)酸水解后分析得知由Lys，Asp，His，Glu，Ala，Val，Tyr以及兩個NII3組成。當(dāng)用DNFB處理后，得到DNP- Asp；用羧肽酶處理可得到游離的Val。此多肽用胰蛋白酶降解時，得到兩個肽段，其中一個（含Lys，Asp，Glu，Ala，Tyr）在pH=6.4時，凈電荷為0；另一個（含His，Glu，Val）可生成DNP-His，在pH=6.4時帶正電荷。當(dāng)多肽用胰凝乳蛋白酶降解時，也得到兩個肽段，其中一個（Asp，Ala，Tyr）在pH=6.4時呈中性，另一個（Lys，His，Glu，Val）在pH=6.4 帶正電荷。此多肽的氨基酸序列如何？

參考答案：Asn-Ala-Tyr-Glu-Lys-His-Gln-Val

4.問答題將含有Asp、Gly、Thr， Leu和Lys的pH=3.0的緩沖溶液，加到預(yù)先用同樣緩沖溶液平衡過的Dowex -50陽離子交換樹脂中，然后用該緩沖溶液洗脫，這5種氨基酸洗脫的順序如何？并說明原因。

參考答案：陽離子交換樹脂分離氨基酸的原理是，各種氨基酸在pH=3.0時帶正電荷多少不同，帶正電荷越多，在樹胎

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5.問答題一種蛋白質(zhì)在用1mmol.L+二硫蘇糖醇（一種含有二硫鍵的糖）處理后，它的SDS凝膠電泳譜帶相對位置由原來的0.67減小為0.64，試解釋原因。

參考答案：硫蘇糖醇與肽鏈中的Cys巰基發(fā)生反應(yīng)，經(jīng)二硫鍵結(jié)合到肽鏈上，蛋白質(zhì)分子量增大，電泳速度降低，所以它的SDS凝膠電泳譜帶相...

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