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問(wèn)答題一個(gè)約有5000堿基對(duì)的小型雙鏈環(huán)狀病毒DNA，它含有由72bp直接串聯(lián)成的重復(fù)順序。這72bp片段中有一個(gè)EcoRI的切點(diǎn)，病毒的其他部位不含有這個(gè)切點(diǎn)。為了揭示該72bp重復(fù)順序的功能，現(xiàn)打算去除一個(gè)72bp片段，試描述構(gòu)建這樣一種修飾性病毒染色體的方法及其所需的酶。

參考答案： 設(shè)原片段為（AB）n，用EcoRI切割，從水解產(chǎn)物分離出重復(fù)序列（n－1）（BA）和兩個(gè)片段5′-A與B-3′，用3′-...

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1.問(wèn)答題入噬菌體DNA是線狀雙鏈DNA，具有重疊互補(bǔ)的末端（“粘性末端”）。DNA連接酶可以將λDNA連成閉合的環(huán)狀DNA。用細(xì)菌堿性磷酸酯酶或牛脾磷酸酯酶預(yù)處理線狀λ噬菌體DNA可以避免DNA連接酶對(duì)它的環(huán)化，試作出解釋。

參考答案：連接酶要求被連接的底物DNA的5′端有磷酸基團(tuán)。

2.問(wèn)答題在某噬菌體實(shí)驗(yàn)中觀察到感染E.coli B只產(chǎn)生很少的噬菌斑再感染E.coti B產(chǎn)生大量噬菌斑，解釋此現(xiàn)象。

參考答案：

存活下來(lái)的病毒獲得了修飾（甲基化）特性，逃脫了E.coli的限制性內(nèi)切酶作用。

3.問(wèn)答題在某噬菌體實(shí)驗(yàn)中觀察到，感染E.coliB只產(chǎn)生很少的噬菌斑，解釋此現(xiàn)象。

參考答案：

E.coli的限制修飾系統(tǒng)起了“DNA免疫”作用。

4.問(wèn)答題試用酶學(xué)方法來(lái)區(qū)別：線狀DNA和環(huán)狀DNA。

參考答案：核酸外切酶不能作用環(huán)狀DNA。

5.問(wèn)答題試用酶學(xué)方法來(lái)區(qū)別：?jiǎn)捂淒NA和雙鏈DNA。

參考答案：

核酸內(nèi)切酶只作用于單鏈DNA。

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